The inventors of the present invention have developed a method for efficiently genetically modifying pigs by solving the drawbacks of the prior art in pigs and allowing breeding of lethal genetic knockout pigs before the breeding age is reached It was an issue. The present invention relates to a method for producing a gene knockout pig cell by cleaving a target gene using mRNA encoding Zinc finger nuclease specific to a target gene, taking out the cell nucleus thereof, and extracting an enucleated unfertilized egg After transplanting to the surrogate mother uterus, gene knockout pig individuals were created. The gene knockout swine produced in this way has a fatal one which can not reach the breeding age like the XSCID pig of the example, but a knockout pig which can be propagated by a blastocyst complementation technique using a normal embryo It also showed that it can be created.発明者らは、ブタにおいて、従来技術の欠点を解消し効率的に遺伝子改変を行う方法を開発すること、また、繁殖年齢に達する前に致死となる遺伝子ノックアウトブタの繁殖を可能にすることを課題とした。 本発明は、目的遺伝子に対して特異的なZincフィンガーヌクレアーゼをコードするmRNAを使用して、目的遺伝子を切断することにより、遺伝子ノックアウトブタ細胞を作製し、その細胞核を取り出し、除核未受精卵に移植の上、代理母子宮に移し、遺伝子ノックアウトブタ個体を作出した。このようにして作出した遺伝子ノックアウトブタは、実施例のXSCIDブタのように繁殖年齢に達し得ない致死的なものがあるが、正常胚を用いる胚盤胞補完技術により繁殖可能な遺伝子ノックアウトブタを作出できることも示した。
