本发明公开了含羟脯氨酸与羟赖氨酸的重组类人胶原蛋白及其生产方法。含羟脯氨酸与羟赖氨酸重组类人胶原蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;所述含羟脯氨酸与羟赖氨酸重组类人胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。该重组类人胶原蛋白利用克鲁维酵母为底盘细胞,分别将四种不同的载体pKLAC1‑hlCOL、pKLC‑P4HA、pKLC‑PDI、pKLC‑LH进行共表达,经过一系列的发酵、纯化方法来获取。重组类人胶原蛋白脯氨酸与赖氨酸的羟化率与天然人源I型胶原相近,分别达到30.7%、43.1%。相比未羟基化的重组类人胶原蛋白,具有更好的促进细胞粘附以及促进伤口愈合的功能。