本发明公开了构建瘦肉率高、生长快且抗蓝耳病和系列腹泻病的优质猪核移植供体细胞的方法及其应用。一种用于猪MSTN‑SST‑CD163‑pAPN四基因编辑的CRISPR/Cas9系统,包含Cas9表达载体、针对猪MSTN基因、SST基因、CD163基因以及pAPN基因的gRNA表达载体;所述的Cas9表达载体的质粒全序列如SEQ ID NO.2所示。本发明分别针对MSTN、SST、CD163和pAPN基因的不同靶点设计了相应的gRNA表达载体,通过筛选获得具有较高编辑效率的gRNA及其表达载体。配合本发明改造的Cas9高效表达载体进行基因编辑,编辑效率比原载体有了显著的提高。