The present invention provides a method for producing natural killer cells using two-step propagation and differentiation methods. In addition, the present invention provides a method of inhibiting tumor cell proliferation and treating a subject having cancer or a viral infection, comprising administering NK cells produced by the method to a subject having a cancer or viral infection.본원은 2-단계 증식 및 분화 방법을 이용하여 천연 킬러 세포를 생성하는 방법을 제공한다. 또한, 본원은 상기 방법으로 생성되는 NK 세포를 암 또는 바이러스 감염이 있는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 암 또는 바이러스 감염이 있는 개체의 종양 세포 증식을 저해하고 상기 개체를 치료하는 방법을 제공한다.