本发明公开一种布鲁氏菌Omp25蛋白抗原表位多肽及其应用。本发明的多肽是:其氨基酸序列中含有SEQ ID N0.1,或SEQ ID N0.1所示的序列经过一个或/和几个氨基酸残基的取代和/或缺失形成的序列形成的多肽,也可以是氨基酸序列为SEQ ID N0.1所示的序列和添加有具有布鲁氏菌免疫源性功能的衍生的多肽。本发明的SEQ ID N0.1多肽可以构成的重组载体或表达盒或转基因细胞或重组菌。而本发明所涉及的各多肽可在制备诊断或预防或治疗布鲁氏菌引起的疾病的试剂或药物中的应用。本发明筛选多肽为化学合成,经刺激DC后可释放出高浓度的IL-4,可作为目的抗原检测检测布鲁氏菌病感染的血清,或制备Omp25蛋白单克隆抗体的抗原。