本发明提供A型和O型口蹄疫病毒特异性引物,具体序列为序列表中SEQ ID No.1‑6。本发明还提供A型和O型口蹄疫病毒检测的试剂盒。本发明较经典的病毒分离、单RT‑PCR和血清型分型方法快捷。本发明可以相当方便地一次性利用3D基因序列鉴定出是否存在口蹄疫感染,而特异性的A型和O型引物可以特异性的鉴定是否是A型或O型口蹄疫病毒感染,可以及时快捷的对疫病情况及区域、环境做出及时快捷的反应,这对及时扑灭或阻断传染病的传播具有积极的意义。另外,本发明具有快速、简单、成本低和所需试剂少的特点,特别适于小样品的提取。因此,本发明具有广泛的市场应用前景。