本发明公开了一种抗流感病毒的单链抗体ScFv及其制备方法和应用,以及编码该单链抗体的基因,含有该基因的载体和宿主细胞等。该抗流感病毒的单链抗体,其是下列蛋白质之一:1)由抗体重链可变区和轻链可变区通过接头肽连接而成的单链抗体,其中轻链可变区的氨基酸序列和重链可变区氨基酸序列分别如序列表中SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示;2)如1)所述的单链抗体经过改造得到的衍生抗体,所述的改造包括氨基酸的缺失、取代或插入,并且该衍生抗体具有抗H1N1流感病毒的抗体活性。本发明的单链抗体分子量约为27kD,能够特异识别H1N1流感病毒,阻断病毒与天然血清的结合。能用来诊断、预防、控制和治疗H1N1流感病毒的感染,或者用于抗病毒的转基因动物育种。