本发明属于生物技术领域,具体涉及CehA突变体蛋白、基因、重组载体及其用途和制备方法。本发明公开了一种CehA突变体蛋白,为如下(a)或(b)的蛋白质:(a)其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所述的蛋白质;(b)至少与(a)中的氨基酸序列70%同源性且具有水解氨基甲酸酯类杀虫剂或毒素活性的蛋白,除了氨基酸序列如SEQ IDNO.7所述的蛋白。同时还公开了上述CehA突变体蛋白的基因、重组载体及其用途和制备方法。本发明所述的CehA突变体蛋白活性更高,能有效水解的氨基甲酸酯类杀虫剂或毒素,并且稳定、易复性,可开发为工业应用低成本和高质量的酶制剂。这为解决氨基甲酸酯类杀虫剂或毒素残留或污染提供了新的选择。