栎枯萎病菌实时荧光PCR检测方法

• 收藏
• 分享

专利权人:

江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心

发明人:

吴翠萍,陈贯源,李彬,粟寒,郑斯竹,安榆林,叶建仁

申请号：

CN200910034194.6

公开号：

CN101701247A

申请日:

2009.09.02

申请国别(地区):

中国

年份:

2010

代理人:

王荷英

摘要：

本发明涉及一种栎枯萎病菌实时荧光PCR检测方法，以样品DNA作为模板，利用特异性引物CF01/CF02以及荧光染料SYBR Green I进行栎枯萎病菌的Real-timePCR扩增，体系在ABI 7500Fast荧光定量PCR仪中预扩增95℃30秒，接着95℃3秒，60℃延伸25秒，共40个循环，在每个循环的延伸阶段同步多次采集荧光；立即进行熔解曲线分析，程序为：95℃，1min；60℃，1min；从60℃开始每升高0.5℃保持10s，连续升高70次，直到95℃为止；如果扩增图谱有出现明显的“S”形曲线，且融解曲线中的Tm吸收峰值与阳性对照的相一致，表示所检测的病菌样品为栎枯萎病菌。本方法对栎枯萎病菌检测灵敏度高，方便快速，可用于各检疫口岸对原木、木质包装、植物性材料以及随之携带的土壤栎枯萎病菌的实时监控。

来源网站：

中国工程科技知识中心

来源网址：

http://www.ckcest.cn/home/