本发明属于生物技术领域,具体涉及一种受磷蛋白基因反义RNA重组AAV载体、病毒、构建方法及应用。所述受磷蛋白基因反义RNA重组AAV载体是分别将如SEQ ID NO.1所示的PLB基因片段和腺相关病毒骨架质粒pAAV‑MCS分别经EcoRI和BamHI双酶切后,将PLB基因片段和腺相关病毒骨架质粒pAAV‑MCS的酶切产物连接而成的。所述重组腺相关病毒由受磷蛋白基因反义RNA重组AAV载体和辅助质粒共转染工程细胞后包装而成。本发明制备的重组腺相关病毒载体克服了非病毒载体的低转染效率,制备的rAAV‑asPLB也克服了重组腺病毒的免疫原性、表达时间短等缺点,具有高转染效率、安全和持久表达等优势。