The present invention relates to a composition for preventing, treating or improving pancreatitis comprising a single clonal stem cell obtained through layer separation culture of improved stem cells and a method for manufacturing the same. According to the improved method of layer separation culture and proliferation of the stem cells of the present invention, it is possible to obtain large quantities of desired single clonal stem cells in a short time through rapid proliferation of single clonal stem cells, and the single clonal intermediate obtained therefrom Mesenchymal stem cells are stem cells with an enhanced therapeutic effect on pancreatitis, and thus can be useful as a therapeutic agent for pancreatitis.본 발명은 개선된 줄기세포의 층분리 배양을 통해 수득되는 단일 클로날 줄기세포를 포함하는 췌장염 예방, 치료 또는 개선용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 개선된 줄기세포의 층분리 배양 및 증식 방법에 따르면, 단일 클로날 줄기세포의 빠른 증식을 통해 단시간에 원하는 단일 클로날 줄기세포의 대량 수득이 가능하고, 이를 통해 수득되는 단일 클로날 중간엽 줄기세포는 췌장염 치료 효과가 증대된 줄기세포인 바, 췌장염 치료제로 유용하게 사용될 수 있다.