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一种靶向敲除家蚕核型多角体病毒复制非必需基因的方法
- 专利权人:
- 天津耀宇生物技术有限公司
- 发明人:
- 田凤鸣,陈剑清,舒特俊,张耀洲
- 申请号：
- CN201210288003.0
- 公开号：
- CN103589745A
- 申请日:
- 2012.08.14
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2014
- 代理人:
- 张瑾
- 摘要：
- 本发明涉及一种靶向敲除家蚕核型多角体病毒BmNPV复制非必需基因的方法，所述方法以BmNPV为材料，通过PCR对其一个复制非必需片段两端的同源序列进行扩增并克隆至载体pUC19中；通过重叠PCR法依次拼接BmNPV的IE1早期启动子、标记基因(EGFP)、终止序列SV40polyA，并克隆至上述载体pUC19获得重组转移载体pUC19-lef7-IE1-EGFP-SV40polyA-gp64；将该载体与野生BmNPV的基因组共转染BmN细胞，经同源重组获得带有荧光标记的重组病毒RBmNPV-EGFP；将其基因组DNA与不带有标记基因的转移载体pUC19-lef7-gp64共转染BmN细胞，通过同源重组获得不带有荧光标记基因的重组病毒RBmNPV。本发明解决了重组病毒基因组中带有标记基因的问题，提高了阳性重组病毒的筛选效率，且此标记基因可以被反复利用。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
