Provided is a separation and purification method for vancomycin hydrochloride of a high purity. The method comprises the following steps: (1) obtaining a vancomycin hydrochloride solution from a crude vancomycin product by ion exchange chromatography and obtaining a concentrate by nanofiltration desalination and concentration； (2) adjusting the concentrate with a hydrochloric acid solution and then performing a column chromatography using a reverse chromatography column for the adjusted concentrate； (3) collecting the chromatographic solution of vancomycin to obtain a mixed chromatographic solution； (4) adjusting the mixed chromatographic solution, and separating the solution and the salts by nanofiltration desalination and concentration to obtain a concentrate； and (5) obtaining a vancomycin dry powder with a chromatographic purity of up to 99% and a pure white appearance by dehydrating and drying the concentrate of step (4), or by solvent crystallization or salting-out crystallization.La présente invention concerne un procédé de séparation et de purification de chlorhydrate de vancomycine de grande pureté. Le procédé comprend les étapes suivantes : (1) obtention d'une solution de chlorhydrate de vancomycine à partir d'un produit brut de vancomycine par chromatographie par échange d'ions et obtention d'un concentrat par désalinisation par nanofiltration et concentration； (2) ajustement du concentrat avec une solution d'acide chlorhydrique puis réalisation d'une chromatographie sur colonne en utilisant une colonne de chromatographie en phase inverse pour le concentrat ajusté； (3) collecte de la solution chromatographique de vancomycine pour obtenir une solution chromatographique mixte； (4) ajustement de la solution chromatographique mixte, et séparation de la solution et des sels par désalinisation par nanofiltration et concentration pour obtenir un concentrat； et (5) obtention d'une poudre sèche de vancomycine avec une pureté chromatographique pouvant atteindre 99
