本发明公开了一种用于检测黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum)的LAMP引物组合物及其应用。用于检测黄瓜枯萎病菌的LAMP引物组合物由1对外侧引物F3/B3和1对内侧引物FIP/BIP组成。本发明还提供了一种应用上述引物的黄瓜枯萎病菌LAMP检测方法,其具体步骤包括:1)提取待测样品基因组DNA,2)LAMP反应体系的建立,3)结果检测;本发明的LAMP反应体系在63℃等温条件下进行,通过1h温育便能快速、方便、高效、高特异、高灵敏地检测到黄瓜枯萎病菌。本发明不需要复杂仪器,能较好地满足对黄瓜枯萎病菌的现场检测,可用于田间病害的早期诊断和病菌的监测、鉴定,为防治黄瓜枯萎病提供可靠的技术和理论依据。