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一种大肠杆菌表达人艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶的生产方法
- 专利权人:
- 陕西慧康生物科技有限责任公司
- 发明人:
- 王俊,郝东,邓晗,史瑾,高恩,赵金礼,杨小玲
- 申请号：
- CN201810799292.8
- 公开号：
- CN109022389A
- 申请日:
- 2018.07.19
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2018
- 代理人:
- 高雪霞
- 摘要：
- 本发明公开了一种大肠杆菌表达人艾杜糖醛酸‑2‑硫酸酯酶的生产方法，该方法通过大肠杆菌重组菌的5L发酵罐高密度培养和诱导表达，对诱导表达后发酵液进行离心收集菌体，高压匀浆法破碎重组菌获得重组蛋白包涵体，重组蛋白包涵体溶解后挂Ni柱亲和层析纯化，经脱盐及冷冻干燥获得重组人艾杜糖醛酸‑2‑硫酸酯酶。本发明方法简化了包涵体繁琐的洗涤步骤，通过摸索合适的超声条件将不溶性的包涵体蛋白变成可溶性蛋白，避免了使用8M尿素或6M盐酸胍等强变性剂对包涵体的变性复性操作，通过Ni柱亲和层析所得蛋白纯度在95％以上，回收效率在70％以上，达到了简单有效快速纯化的效果。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
