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新疆野扁桃自交不亲和SSK基因的克隆及双元表达载体的构建方法
- 专利权人:
- 新疆农业大学
- 发明人:
- 曾斌,夏江宏,田嘉,李伟阳,刘梦雯,刘楠楠
- 申请号：
- CN201510870324.5
- 公开号：
- CN105255905A
- 申请日:
- 2015.12.02
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2016
- 代理人:
- 李静
- 摘要：
- 本发明公开了一种新疆野扁桃自交不亲和SSK基因的克隆及双元表达载体的构建方法，该方法用TRIzol法提取新疆野扁桃花粉的总RNA，测定OD260/OD280比值为2.011；将PCR产物进行凝胶回收，回收后的产物与pMD-18T克隆载体进行连接，转化结束后进行质粒的提取，将提取的质粒进行PCR及酶切验证，获得了602bp的DNA条带；经测序该基因ORF为534bp，编码177个氨基酸的多肽，将该基因在NCBI上进行Blast比对，和蔷薇科李属（Prunus）的多个物种的SSK1基因的相似度高达98%，用限制性内切酶Pst I和BamH I将目的基因和pCAMBIA1303表达载体分别进行双酶切后，将质粒进行PCR反应及酶切验证；分别获得了12361bp的pCAMBIA1303载体和602bp的目的片段；说明双元表达载体构建成功，命名为p1303-PtSSK1。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
