新疆野扁桃自交不亲和SSK基因的克隆及双元表达载体的构建方法

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专利权人:

新疆农业大学

发明人:

曾斌,夏江宏,田嘉,李伟阳,刘梦雯,刘楠楠

申请号：

CN201510870324.5

公开号：

CN105255905A

申请日:

2015.12.02

申请国别(地区):

中国

年份:

2016

代理人:

李静

摘要：

本发明公开了一种新疆野扁桃自交不亲和SSK基因的克隆及双元表达载体的构建方法，该方法用TRIzol法提取新疆野扁桃花粉的总RNA，测定OD₂₆₀/OD₂₈₀比值为2.011；将PCR产物进行凝胶回收，回收后的产物与pMD-18T克隆载体进行连接，转化结束后进行质粒的提取，将提取的质粒进行PCR及酶切验证，获得了602bp的DNA条带；经测序该基因ORF为534bp，编码177个氨基酸的多肽，将该基因在NCBI上进行Blast比对，和蔷薇科李属（Prunus）的多个物种的SSK1基因的相似度高达98%，用限制性内切酶Pst I和BamH I将目的基因和pCAMBIA1303表达载体分别进行双酶切后，将质粒进行PCR反应及酶切验证；分别获得了12361bp的pCAMBIA1303载体和602bp的目的片段；说明双元表达载体构建成功，命名为p1303-PtSSK1。

来源网站：

中国工程科技知识中心

来源网址：

http://www.ckcest.cn/home/