本发明涉及一种牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的灭活疫苗及其制备方法,属于兽用生物制品领域。本发明所述疫苗由BVDV I a、BVDV I b、BVDV II a、BVDV II b四种基因亚型组成,牛病毒性腹泻灭活疫苗是利用细胞转瓶、全悬浮及微载体培养的传代细胞系进行病毒增殖,并对制苗工艺等进行了优化。疫苗安全和效力检验结果显示:使用本发明的牛病毒性腹泻灭活疫苗免疫牛后没有任何局部和全身不良反应,所有的牛都产生了免疫保护,说明本发明的疫苗安全可靠,可预防不同BVDV基因亚型引起的疾病,本发明所述的疫苗还包括以上四个基因亚型抗原制备的各型单价灭活疫苗、二价灭活疫苗和四价灭活疫苗。