ESKANDARI, Nasim,ELLIOTT, Janet A. W.,MCGANN, Locksley E.,NYCHKA, John A.,MARQUEZ-CURTIS, Leah A.
申请号：
CACA2019/051144
公开号：
WO2020/037416A1
申请日:
2019.08.21
申请国别(地区):
CA
年份:
2020
代理人:
摘要：
OF THE DISCLOSURE Cryopreservation of endothelial cell monolayers is one of the major challenges in the cryopreservation of complex tissues. Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) in suspension are available commercially and recently their post-thaw cell membrane integrity was significantly improved by cryopreservation in 5% dimethyl sulfoxide (DMSO) and 6% hydroxyethyl starch (HES). However, cryopreservation of cells in monolayers has been elusive. The exact mechanisms of damage during cell monolayer cryopreservation are still under investigation. Here, we show that a combination of different factors contribute to significant progress in cryopreservation of cell monolayers. The addition of 2% chondroitin sulfate to 5% DMSO and 6% HES and cooling at 0.2 or 1 °C/min led to high membrane integrity (97.3 ± 3.2%) immediately after thaw when HUVECs were cultured on a substrate with a coefficient of thermal expansion similar to that of ice. The optimized cryopreservation protocol was applied to monolayers of primary porcine corneal endothelial cells, and resulted in high post-thaw viability (95.9 ± 3.7% membrane integrity) with metabolic activity 12 hours post-thaw comparable to unfrozen control.La cryoconservation de monocouches de cellules endothéliales est l'un des défis majeurs de la cryoconservation de tissus complexes. Les cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVEC) en suspension sont disponibles dans le commerce et récemment leur intégrité de membrane cellulaire post-décongélation a été significativement améliorée par la cryoconservation dans 5 % de diméthylsulfoxyde (DMSO) et 6 % d'amidon hydroxyéthylé (HES). Cependant, la cryoconservation de monocouches de cellules restait hors d'atteinte. Les mécanismes exacts de l'endommagement lors de la cryoconservation de monocouches de cellules sont toujours étudiées. Ici, nous avons démontré qu'une combinaison de différents facteurs contribue à une progression significative dans la cryoconservati
