本发明属于生物技术技术领域,具体涉及一种用于区分八种猪胸膜肺炎放线杆菌血清型的复合PCR分型试剂盒及其应用。所述复合PCR分型试剂盒包括:PCR试管、PCR混合酶、5对特异性引物、阳性对照、阴性对照和ddH2O,所述5对特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1~10所示。所述复合PCR分型试剂盒用于区分1型、3型、4型、5型、6型、10型、12型和14型八种猪胸膜肺炎放线杆菌血清型具有很高的准确性,特异性好,灵敏度达pg级;进行鉴别的样品来源包括分离的菌种资源或动物组织,可以直接将组织洗涤液或单菌落、菌液经沸水裂解后作为模板,省去了细菌基因组提取的繁琐,大大节约了时间、人力和成本。