PROBLEM TO BE SOLVED: To provide generating and screening methods of a novel protease capable of cutting a protein known as responsible for a disease.SOLUTION: The method for identifying the protease capable of cutting a substrate sequence includes: a process of generating the library of a protease sequence a process of each member of the library having a protease backbone having N number of mutations against a wild type backbone sequence a process of measuring the activity of each member of the library when the substrate sequence is cut a process of comparing the activity of each member with an average activity of the library and a process of identifying the protease having the highest cleaving activity, wherein N is a positive integer.COPYRIGHT: (C)2013,JPO&INPIT【課題】疾患に関与することが知られるタンパク質を切断する新規プロテアーゼの生成およびスクリーニングの提供。【解決手段】基質配列を切断するプロテアーゼを同定する方法であって、該方法が、プロテアーゼ配列のライブラリーを生成する工程であって、該ライブラリーの各メンバーが、野生型骨格配列に対してN個の変異を有するプロテアーゼ骨格を有する、工程;該基質配列を切断する際における該ライブラリーの各メンバーの活性を測定する工程;および各メンバーの該活性を該ライブラリーの平均活性に対して比較する工程であって、それによりどのプロテアーゼが最も高い切断活性を有するかを同定する、工程を包含し、ここでNは正の整数である、方法。【選択図】図1