本发明公开了一种提升了安全性，表达密码子优化的Anti‑MART‑1 TCR基因的慢病毒载体制备及其应用。该载体的安全性通过将原慢病毒载体的WPRE元件替换成OPRE元件实现，该元件的序列如SEQ ID No.:1所示，并于载体多克隆位点处插入密码子优化的Anti‑MART‑1 TCR核苷酸序列，序列如SEQ ID No.:2所示。OPRE元件对慢病毒的转染效率和包装滴度与WPRE相比均无显著影响；密码子优化后的Anti‑MART‑1 TCR基因与野生型基因的同源性为79%，在T细胞基因修饰中能显著提升Anti‑MART‑1 TCR的表达水平；经过基因修饰表达Anti‑MART‑1 TCR的T细胞与黑色素瘤细胞株共培养后，其IFN‑γ的分泌水平也显著提高；该T细胞还能显著延长植入了黑色素瘤的荷瘤小鼠的生存时间，抑制黑色素瘤的增长。改造所得到的pRRLSIN.cPPT.MSCV‑CoAnti‑MART‑1/GFP.OPRE载体可用于细胞治疗中TCR‑T细胞的构建等用途。
