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一种敲除人PIN1基因的方法
专利权人:
SHENZHEN BIOCAN TECHNOLOGIES CO.; LTD.
发明人:
MAO, Jiyan
申请号:
CN2018091727
公开号:
WO2019237397A1
申请日:
2018.06.16
申请国别(地区):
CN
年份:
2019
代理人:
摘要:
Provided is a method for knocking out a human PIN1 gene by using a CRISPR-Cas9 gene editing technology. Specific operation steps comprise: (1) designing an sgRNA sequence; (2) performing connection, conversion and amplification of sgRNA; (3) performing plasmid transfection on a 293T cell and packaging same to lentivirus; (4) performing lentivirus infection on a target cell and performing puromycin screening; and (5) performing verification on a PIN1 gene knockout result. Experiments prove that the provided method for knocking out the PIN1 gene can efficiently knock out the PIN1 gene of a cell, and can serve as a powerful tool to be applied to PIN1-related drug research and development.La présente invention concerne un procédé d'inactivation d'un gène PIN1 humain au moyen d'une technologie d'édition de gène CRISPR/Cas9. Les étapes de fonctionnement spécifiques comprennent : (1) la conception d'une séquence sgARN ; (2) la réalisation d'une connexion, d'une conversion et d'une amplification de sgRNA ; (3) la réalisation d'une transfection de plasmide sur une cellule 293T et son encapsidation dans un lentivirus ; (4) la réalisation d'une infection par un lentivirus sur une cellule cible et la réalisation d'un criblage de puromycine ; et (5) la réalisation d'une vérification sur un résultat d'inactivation du gène PIN1. Des expériences ont montré que ce procédé d'inactivation du gène PIN1 peut efficacement inactiver le gène PIN1 d'une cellule et peut constituer un outil puissant pour la recherche et le développement de médicaments liés à PIN1.提供了一种利用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除人PIN1基因的方法,具体的操作步骤包括有:(1)设计sgRNA序列,(2)sgRNA的连接、转化与扩增,(3)质粒转染293T细胞包装成慢病毒,(4)目的细胞的慢病毒感染及嘌呤霉素筛选,(5)PIN1基因敲除结果验证。实验证明所提供的敲除PIN1基因的方法可以高效地敲除细胞的PIN1基因,可作为有力工具应用于与PIN1相关的药物研究与开发。
来源网站:
中国工程科技知识中心
来源网址:
http://www.ckcest.cn/home/
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