本发明属于生物技术领域,具体涉及一种无抗生素四价抗病虫和除草剂植物表达载体及应用。所述载体的T-DNA区结构为:右边界-35S启动子-正向双价抗病序列-内含子-反向双价抗病序列-OCS终止子-Ubi启动子-抗虫基因-NOS终止子-NOS启动子-抗除草剂基因-NOS终止子-左边界,T-DNA区左右边界内无抗生素基因,其中正向双价抗病序列即甘蔗花叶病毒和甘蔗黄叶病毒双价干扰序列,其DNA序列如SEQ ID NO.1所示。得到的植物表达载体可用于转化获得同时具有4种抗性的转基因作物,并且获得的转基因作物没有抗生素抗性基因,可提高转基因作物的安全性。并且同一次转化中可获得同时具有4种抗性的转基因作物,与单一抗性的遗传转化相比,可以提高效率3倍以。