DANKOOK UNIVERSITY CHEONAN CAMPUS INDUSTRY ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION;단국대학교 천안캠퍼스 산학협력단
发明人:
KANG DAE KYUNG,강대경,CHAE JONG PYO,채종표,OH JU KYOUNG,오주경
申请号：
KR1020190098260
公开号：
KR1020190096910A
申请日:
2019.08.12
申请国别(地区):
KR
年份:
2019
代理人:
摘要：
The present invention relates to a surface expression vector for preparing a porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) vaccine, whose expression is inducible by bile acid, and which comprises a gene encoding a membrane protein of PEDV； transformed lactic acid bacteria transformed thereby； and a method of preparing the surface expression vector for the PEDV vaccine and the transformed recombinant lactic acid bacteria. The PEDV vaccine comprising Lactobacills plantarum SK156 (KACC 81063BP), the recombinant lactic acid bacteria transformed by the method and contained as an effective component, may be used to prevent and treat the PEDV infection, thereby preventing economic loss due to PEDV in the farms.본 발명은 미생물의 세포표면에서 발현되는 것으로, PEDV의 막단백질 유전자 중 항원결정기로 선별된 되는 아미노산 서열열을 암호화하는 염기서열을 포함하는 PEDV 백신 제조용 표면발현 벡터, 신규한 담즙산에 의해 발현이 유도되는 PEDV 백신 제조용 표면발현 벡터에 의해 M1, M2, M3 단백질이 세포표면에 발현된 형질전환유산균, 이러한 유산균을 이용한 백신에 관한 것이다. 상기 PEDV 막단백질 유전자의 염기서열은 서열번호 4로도 기재되어 있으며, 상기 PEDV 막단백질 유전자 중에서 항원성이 높은 부위인 항원결정기 M1, M2, M3의 각 아미노산 서열을 서열번호 1, 2 또는 3을 가진다. 그리고 본 발명은 상기 PEDV의 막단백질 유전자 중에서 가장 변이가 적고 항원성이 높은 영역 중 유산균 발현벡터와 융합할 각 결정항원기를 준비하는 단계, Signal sequence(SP)및 cell wall-anchoring domain(CWA) 증폭에 사용한 프라이머로, SP forward primer에 PstI 제한효소 사이트를, CWA reverse primer에는 HindⅢ 제한효소 사이트를 부착하고, 각각의 M1, M2, M3 항원결정기를 각각 SP DNA와 혼합한 후에 각각 PCR을 실시함으로써, SP와 M1, M2, M3 항원결정기가 각각 연결된 fusion gene(SP-M1, SP-M2, SP-M3)를 구축하는 단계 및 상기 SP와 M1, M2, M3 항원결정기가 각각 연결된 fusion gene(SP-M1, SP-M2, SP-M3)를 구축하여 선택된 상기 항원결정기를 유산균벡터 pBCEG29의 PstI-HindIII 사이트에 도입하여(6.5Kbp 크기의 pULP3-SPM1CWA, pULP3-SPM2CWA, pULP3-SPM3CWA) 를 각각 구축하는 단계를 포함하는 담즙산에 의해 발현이 유도되는 PEDV 백신용 표면발현벡터 제조방법과 PEDV 백신용 표면발현벡터에 의하여 형질전환된 재조합 유산균의 제조방법에 관한 것으로서, 본 발명인 담즙산에 의해 발현이 유도되는 돼지 유행성 설사 바이러스 (porcine epidemic diarrhea virus, PEDV) 백신용 벡터로 형질전환된 Lactobacillus plantarum 재조합 유산균을 이용함으로써 PEDV의 감염을 예방하고 치료함으로써 돼지의 PEDV 질병으로 인한 농가의 경제적 손실을 막을 수 있다.
