WANG, Nien-Hwa, Linda,YUAN, Chongli,CRAWFORD, Morgan, H.
申请号：
USUS2016/044278
公开号：
WO2017/019776A1
申请日:
2016.07.27
申请国别(地区):
US
年份:
2017
代理人:
摘要：
Methods of refolding proteins are provided, especially cysteine-containing proteins such as insulin, proinsulin, and analogues thereof. The methods make used of tandem folding via the addition, at two different time, of two different reducing agents. A first reversible reducing agent can be added to induce folding and, at a later time, a second irreversible reducing agent can be added to prevent and/or reverse the formation of aggregates via intermolecular sulfide bonds. The methods can be used to reform a variety of cysteine-containing proteins with high yield of the native form, e.g. about 60 mol%, 70 mol%, or more.L'invention concerne des procédés de repliement de protéines, notamment de protéines contenant de la cystéine telles que l'insuline, la pro-insuline et analogues. Les procédés font usage du repliement en tandem par l'intermédiaire de l'addition, à deux moments différents, de deux agents réducteurs différents. Un premier agent réducteur réversible peut être ajouté afin d'induire le repliement, et à un moment ultérieur, un second agent réducteur irréversible peut être ajouté pour empêcher et/ou inverser la formation d'agrégats par l'intermédiaire des liaisons sulfures intermoléculaires. Les procédés peuvent être utilisés pour reformer une diversité de protéines contenant de la cystéine en présentant un rendement élevé de la forme native, par exemple environ 60 % en moles, 70 % en moles, ou plus.
