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一种适于牙鲆性腺冰冻切片mRNA原位杂交的方法
- 专利权人:
- 中国科学院海洋研究所
- 发明人:
- 焦爽,范兆飞,谭训刚,尤锋
- 申请号：
- CN201610082004.8
- 公开号：
- CN105648065A
- 申请日:
- 2016.02.05
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2016
- 代理人:
- 李颖`周秀梅
- 摘要：
- 本发明涉及mRNA原位杂交技术，具体的说是一种适于牙鲆性腺冰冻切片mRNA原位杂交的方法。将牙鲆性腺依次经过量浓度为4％PFA溶液固定和100％甲醇溶液通透，而后长期保存；固定后保存的样品经复水、20-30％蔗糖沉降后，进行OCT包埋和冰冻切片，55℃干燥2-3h，获得冰冻切片作为原位杂交样品；上述样品经过量DEPC水洗涤3-5min以除去样品切片OCT包埋剂；洗涤、蛋白酶K消化、固定而后经预杂交，预杂交后与含有牙鲆RNA探针的杂交液混合于50-70℃下杂交过夜；杂交处理后洗涤，并经抗体孵育，再洗涤，避光显色，终止显色，再固定，封片，进而实现对牙鲆性腺相关基因在mRNA水平的表达定位。本发明解决了牙鲆性腺组织难于直接进行性腺原位杂交的问题，能够清晰地描述牙鲆相关基因在性腺中的表达定位(mRNA水平)。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
