本发明公开了一种检测转基因烟草中外源基因拷贝数的方法,利用的是实时荧光定量PCR技术,利用该方法可以简单、快速、准确的检测转基因烟草中外源基因拷贝数。本发明公开了一对引物,由如下(1)和(2)所示的DNA分子组成:(1)SEQ ID No.3所示的DNA分子;(2)SEQ ID No.4所示的DNA分子。本发明选择烟草自身单拷贝的内源基因核糖核酸还原酶基因(RNR2)作为内参基因,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术检测转基因烟草中外源基因的拷贝数。本发明公开的方法可以为今后转基因烟草的拷贝数分析提供一种新的思路,满足基因工程中对优良转化植株的筛选需求。