The United States of America; as represented by the Secretary; Department of Health and Human Services
发明人:
申请号：
EP16758309.5
公开号：
EP3285812A2
申请日:
2016.04.22
申请国别(地区):
EP
年份:
2018
代理人:
摘要：
Disclosed are polynucleotides, polypeptides, and gene therapy vectors relating to biologically active methylmalonyl-CoA mutase enzymes, internally tagged with an immunoaffinity and detection epitope, which has been designed and tested in mouse models of methylmalonic acidemia (MMA). The polypeptides and polynucleotides of the present invention contain a mitochondrial leader sequence fused to tag, such as an HA, 3xFLAG, or V5 tag placed in a region of the methylmalonyl-CoA mutase enzyme that maintains mitochondrial localization and function, e.g., the 5′ end of a methylmalonyl-CoA mutase polynucleotide is replaced with an engineered nucleotide sequence that encodes the endogenous mitochondrial importation sequence, a mitochondrial protease cleavage site, and a tag. The polynucleotides and polypeptides of the invention are useful to treat conditions such as MMA, and to assay both activity and biodistribution after gene therapy in varied models of MMA.La présente invention concerne des polynucléotides, des polypeptides, et des vecteurs de thérapie génique se rapportant aux enzymes méthylmalonyl-CoA mutase biologiquement actives, marqués de manière interne avec un épitope d'immunoaffinité et de détection, qui a été conçu et testé dans des modèles murins d'acidémie méthylmalonique (MMA). Les polypeptides et les polynucléotides de la présente invention contiennent une séquence leader mitochondriale liée au marqueur, tel qu'un marqueur HA, 3xFLAG, ou V5 placé dans une région de l'enzyme méthylmalonyl-CoA mutase qui maintient la localisation et la fonction mitochondriale, par exemple l'extrémité 5' d'un polynucléotide de méthylmalonyl-CoA mutase est remplacée par une séquence nucléotidique modifiée qui code pour la séquence d'importation mitochondriale endogène, un site de coupure par les protéases mitochondriales, et un marqueur. Les polynucléotides et les polypeptides de l'invention sont utiles pour le traitement d'états pathologiques tels que la MMA, et pour le dosage à
