本发明涉及分子生物学以及基因工程领域,具体的说是一种交叉保护性疫苗抗原及其制备方法和应用。具体为所述交叉保护性疫苗抗原具有序列表SEQ ID No.1中的碱基序列,制备方法:构建pET258质粒而后与以哈氏弧菌T4为模板,用引物VHQF5和VHQR5进行PCR扩增得产物构建的质粒pBTQ连接,转化入大肠杆菌得质粒pEVQ,而后诱导得抗原VhdQ;所述交叉保护性疫苗抗原与B187-PBS培养液混合作为哈氏弧菌和副溶血弧菌交叉保护性疫苗抗原。本发明所得疫苗抗原存在于多种病原性弧菌中,具高度保守性,因而具有交叉保护效应。本发明所得高效原核表达系统,能够用于大量表达上述交叉保护抗原,由此制备的抗原蛋白保有其天然免疫活性,可以直接用于免疫防治。