本发明涉及分子生物学、基因工程技术以及生物医药领域,具体涉及一种针对SOX4基因靶点的小干扰RNA、短发卡RNA及重组载体和应用。小干扰RNA包括SEQ ID NO.1所示的正义链和SEQ ID NO.2所示的反义链。短发卡RNA包括SEQ ID NO.3所示的正义链和SEQ ID NO.4所示的反义链。包含短发卡RNA的重组载体能在宿主细胞内转录得到SOX4‑shRNA,经宿主细胞加工后可生成小分子干扰RNA,并靶向SOX4的信使RNA,降低SOX4的表达,导致基因沉默效应,有效抑制食管鳞癌细胞的增殖并促进化疗药物阿霉素诱导的食管鳞癌细胞的衰老,具有抗肿瘤应用价值,为进一步研究SOX4在肿瘤细胞衰老逃逸中的功能及靶向SOX4的药物研发提供了基础。