本发明提供了一种胡蜂毒肽反序类似物WVD‑Ⅱ及其制备方法和应用,属于涉及多肽合成技术领域所述胡蜂毒肽反序类似物WVD‑Ⅱ的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明的胡蜂毒肽反序类似物WVD‑Ⅱ的N端带有正电荷,能够与带负电的细胞膜结合,C端的疏水性氨基酸形成α螺旋结构,能够在细胞膜表面穿孔,从而导致细菌死亡。本发明的胡蜂毒肽反序类似物WVD‑Ⅱ经体外抗菌活性测定表明,其对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及真菌均具有显著的杀菌效果,并且有着较佳的稳定性,溶血毒性低,具有广谱、高效和安全的特点。本发明的胡蜂毒肽反序类似物WVD‑Ⅱ可以在临床上作为活性成分替代传统抗生素进行治疗。