本发明涉及一种用于检测鱼类小清蛋白的荧光定量PCR方法及引物对,属于食品安全检测技术领域,所述PCR方法包括以下步骤:一、设计特异性扩增引物对;二、提取样品DNA;三、通过扩增曲线和溶解曲线判断样品是否含有小清蛋白基因;本发明还涉及一种引物对,该引物对具体为:鱼类小清蛋白引物的碱基序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。与现有技术相比,本发明利用生物信息学和比较基因组学,筛选到鱼小清蛋白的共有基因序列,并以此序列设计特异性扩增引物对,本发明的引物对待测样本进行荧光定量PCR检测,可快速、灵敏、特异地检测食品中不同鱼种及制品中的过敏原成份—小清蛋白。