本发明公开了一种利用转基因动物的乳腺生产人转铁蛋白的方法及其表达载体。本发明的方法包括利用含有人转铁蛋白基因表达盒的载体将人转铁蛋白基因表达盒转入哺乳动物基因组中获得转基因动物,从转基因动物乳汁中获得人转铁蛋白,其中,该表达盒从5’到3’依次包括启动子、人转铁蛋白基因和牛生长激素基因终止子,所述启动子是山羊β-酪蛋白基因,其序列如SEQ ID NO.1所示,所述人转铁蛋白基因是序列表中SEQ ID NO.2所示,所述的载体是真核表达载体pcDNA3.1,所述的哺乳动物不包括人。本发明的方法,在动物的乳汁中人转铁蛋白的浓度至少可达到5g/L,比现有的方法提高了160倍以上,具有巨大的商业利用价值。