本发明提供了一种检测食品中蜡样芽孢杆菌的有扩增内标的PCR方法及试剂盒,与现有方法相比,其优点是使用方便、可靠性好、检测周期短、灵敏度高、特异性强、成本低廉、操作步骤简单,适用于高通量操作、标准化操作,对提高食品安全具有重要意义。所述方法包括:(1)利用primer premier 6.0软件设计针对蜡样芽孢杆菌的一对特异性引物A/B和一对扩增内标引物C/D;(2)采集可疑样品进行增菌培养,提取DNA后,A/B和C/D两对引物、扩增内标模板、检测样品DNA共同进行扩增;(5)取试剂盒的PCR反应预混液配置25ul反应体系进行扩增,琼脂糖凝胶电泳后紫外灯下观察检测结果。