JOÃO ANTÓNIO DE SAMPAIO RODRIGUES QUEIROZ,CARLA PATRÍCIA ALVES FREIRE MADEIRA CRUZ,FANI PEREIRA DE SOUSA,PATRÍCIA ALEXANDRA NUNES PEREIRA,TIAGO ANDRÉ AFONSO DOS SANTOS
申请号：
PT10836015
公开号：
PT108360A
申请日:
2015.04.14
申请国别(地区):
PT
年份:
2016
代理人:
摘要：
This inven\u00c7\u00c3o aims to overview and carateriza\u00c7\u00c3o a new support cromatogr\u00c1fico for purification of DNA plasm\u00cddico (pDNA) superenrolado, using the amino\u00c1cido L-tyrosine as affinity ligand for affinity chromatography. This support enables you to explore the affinity and mimic naturally occurring between areas intera\u00c7\u00d5es biological protein and nucleic acids.The process consists of the immobilisation of the amino\u00c1cido L-tyrosine in a matrix of Sepharose, previously activated by rea\u00c7\u00d5es ep\u00d3xido.The purification involves the application of the sample of pDNA in support cromatogr\u00c1fico with L - tyrosine immobilized, previously a balanced solution with high salt content.By applying a gradient step is then to decrease the concentration of saline for the recovery of isoform of pDNA superenrolada with high efficiency and with high degree of purity for potential application in in vitro and in vivo tests.A PRESENTE INVENÇÃO TEM COMO OBJETIVO A SÍNTESE E CARATERIZAÇÃO DE UM NOVO SUPORTE CROMATOGRÁFICO PARA PURIFICAÇÃO DE DNA PLASMÍDICO (PDNA) SUPERENROLADO, UTILIZANDO O AMINOÁCIDO L-TIROSINA COMO LIGANDO DE AFINIDADE, POR CROMATOGRAFIA DE AFINIDADE. ESTE SUPORTE DE AFINIDADE PERMITE EXPLORAR E MIMETIZAR AS INTERAÇÕES BIOLÓGICAS QUE OCORREM NATURALMENTE ENTRE DOMÍNIOS PROTEICOS E ÁCIDOS NUCLEICOS. O PROCESSO CONSISTE NA IMOBILIZAÇÃO DO AMINOÁCIDO L-TIROSINA NUMA MATRIZ DE SEPHAROSE, PREVIAMENTE ATIVADA ATRAVÉS DE REAÇÕES EPÓXIDO. A PURIFICAÇÃO ENVOLVE A APLICAÇÃO DA AMOSTRA DE PDNA NO SUPORTE CROMATOGRÁFICO COM L-TIROSINA IMOBILIZADA, PREVIAMENTE EQUILIBRADO COM UMA SOLUÇÃO DE ELEVADO TEOR DE SAL, APLICANDO-SE DE SEGUIDA UM GRADIENTE POR PASSOS COM DIMINUIÇÃO DA CONCENTRAÇÃO SALINA PARA RECUPERAÇÃO DA ISOFORMA DE PDNA SUPERENROLADA COM ALTA EFICIÊNCIA E COM ELEVADO GRAU DE PUREZA PARA POTENCIAL APLICAÇÃO EM ENSAIOS IN VITRO E IN VIVO.
