The present invention relates to a composition for semen cryopreservation of canine animals including mesenchymal stem cells as an active ingredient, wherein the cryopreservative to which the Ad-MSCs of the present invention is added is the survivability of fertilizers. And since the mobility enhancement effect is excellent, cryopreservation of the semen of the canine can be utilized in various ways, such as artificial insemination, can be useful for breeding and breeding canine animals.본 발명은 중간엽줄기세포(mesenchymal stem cell)를 유효성분으로 포함하는 개과(Canidae) 동물의 정액 동결보존용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 Ad-MSCs가 첨가된 동결보존제는 개 정자의 생존성 및 운동성 증진 효과가 우수하므로, 개과 동물의 정액을 동결보존하여 인공수정 등의 다양한 방법으로 활용하여 개과 동물의 육종 및 품종 개량에 유용하게 활용될 수 있을 것이다.