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一种高性能M‑MLV逆转录酶的制备方法
- 专利权人:
- 淮海工学院;江苏愚公生命科技有限公司
- 发明人:
- 李京,高嵩,陈祉月,罗志丹,龚雪梅,张惠铭,张羽,潘绮雯
- 申请号：
- CN201710253825.8
- 公开号：
- CN106906237A
- 申请日:
- 2017.04.18
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2017
- 代理人:
- 刘喜莲
- 摘要：
- 本发明是一种高性能M‑MLV逆转录酶的制备方法，包括突变体克隆构建，所构建的突变体质粒序列均经过测序确认，得到17个突变体质粒；然后进行突变体的筛选：将野生型pET28b‑M‑MLV和17个突变体质粒转化进入大肠杆菌感受态细胞中，培养、诱导突变酶表达；收集菌体获得突变酶粗提液；选择有蛋白表达的突变酶粗提液，在不同温度下进行逆转录活性筛选：将活性筛选结果阳性的突变体在液体培养基中培养、诱导蛋白表达；收集菌体纯化得到M‑MLV逆转录酶。本发明方法采用分子理性设计与功能筛选相结合，在较小范围内筛选即获得高热稳定性M‑MLV逆转录酶，其热稳定性达到耐热能力65°C。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
