基于DNA条形码的鉴别乌梢蛇的引物及PCR-RFLP方法和试剂盒

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专利权人:

晁志

发明人:

晁志

申请号：

CN201410348910.9

公开号：

CN104164494A

申请日:

2014.07.21

申请国别(地区):

中国

年份:

2014

代理人:

董红曼

摘要：

本发明属于中药品种鉴定技术领域，提出一种鉴别乌梢蛇及其伪品的聚合酶链反应-限制性酶切图谱分子鉴定方法(PCR-RFLP)。本发明提出的PCR扩增所用引物序列为：DK1-CO1：5’-CAA CTA ACC ACA AAG ACA TCG G-3’，DK1-CO2：5’-CTT CTG GGT GGC CGA AAAATC A-3’；乌梢蛇的特征DNA碱基序列为：5’-ACTAGT-3’(位于COI序列第121位至126位)及5’-GGAAACC-3’(位于COI序列第353位至359位)；限制性内切酶Spe I可识别并切割特征序列5’-ACTAGT-3’，而限制性内切酶BstE II不能识别特征序列5’-GGAAACC-3’，两种限制性内切酶仅将乌梢蛇双酶切成两条片段。本发明鉴定过程为：提取样本DNA；用引物DK1-CO1、DK1-CO2进行PCR扩增；纯化PCR产物；用限制性内切酶Spe I和BstE II消化PCR产物；琼脂糖凝胶电泳分析结果；通过与乌梢蛇的PCR-RFLP特征结果相比较，即可判断供试品是否为乌梢蛇。本发明还提供用于鉴别方法的试

来源网站：

中国工程科技知识中心

来源网址：

http://www.ckcest.cn/home/