本发明属于生物技术领域,具体涉及一种全猪源非洲猪瘟病毒单克隆抗体及其制备的方法和应用。所述单克隆抗体包括重链恒定区、重链可变区、轻链恒定区和轻链可变区,所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:5所示,轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:6所示。本发明的特异性针对非洲猪瘟病毒的全猪源单克隆抗体,保留了轻链、重链可变区的天然配对,具有基因多样性好、全猪源、抗体亲和力好、特异性强等优势,可在真核表达系统中进行高效表达。本发明为开发非洲猪瘟病毒诊断试剂盒提供了新型原材料,也为研制全猪源单克隆抗体的预防与治疗性药物提供了新的技术支持。