The invention relates to methods of detecting the presence or activity of a target molecule in a sample comprising a) contacting the sample with i) a polynucleotide encoding a biosensor polypeptide comprising a modified circularly-permuted thermostable luciferase and a linker linking the C-terminal portion of the thermostable luciferase to the N-terminal portion of the thermostable luciferase, the modified circularly-permuted thermostable luciferase modified relative to a parental circularly-permuted thermostable luciferase, the linker comprising a sensor region capable of interacting with a target molecule in a cell, and wherein the modified circularly-permuted thermostable luciferase has an enhanced response after interaction of the biosensor with the target molecule relative to at least one of: A) the parental circularly-permuted thermostable luciferase in the presence of the target molecule, or B) the modified circularly-permuted thermostable luciferase in the absence of the target molecule； and ii) a substrate for the modified thermostable luciferase； and b) detecting luminescence in the sample.La présente invention concerne un polynucléotide codant pour un biocapteur polypeptidique comprenant une luciférase thermostable modifiée à permutation circulaire et un lieur liant la partie C-terminale de la luciférase thermostable à la partie N-terminale de la luciférase thermostable. La luciférase thermostable modifiée à permutation circulaire est modifiée par rapport à une luciférase thermostable à permutation circulaire parente. Le lieur contient une région sensorielle pouvant interagir avec une molécule cible dans une cellule. La luciférase thermostable modifiée à permutation circulaire présente une réponse améliorée après interaction du biocapteur avec la molécule cible par rapport à la luciférase thermostable à permutation circulaire parente en présence de la molécule cible. En variante, la luciférase thermostable modifiée à permutation circulaire présente une ré
