本发明公开了一种水稻种子休眠性调控基因OsMPK14及其应用,属于生物技术和作物基因工程技术领域。本发明所公开的水稻种子休眠性调控基因OsMPK14在提高水稻种子休眠性中起到重要作用,其序列如SEQ ID NO.2所示,编码氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白质。该应用具体是通过CRISPR/Cas9系统编辑、干扰或敲除OsMPK14基因,破坏OsMPK14基因的生物学功能,获得抗穗发芽水稻株系。通过本发明提供的基因OsMPK14敲除方法可敲除现有材料的OsMPK14基因,筛选敲除后代,可获得休眠性增强的水稻株系,能够有效改良其穗发芽抗性。