本发明公开了一种从土壤中定量检测香蕉枯萎病菌4号小种的方法,该方法步骤为:对被检样品进行预处理,提取被检样品的DNA;特异性引物的制备;荧光核酸恒温扩增检测技术RealAmp反应;RealAmp标准曲线的构建;结果判断。本发明提供的实时荧光核酸恒温扩增检测技术是将新一代的核酸恒温扩增技术和实时荧光检测技术相结合的一种新型核酸检测技术,具有高灵敏度、高特异性、低污染、反应稳定的优点,RealAmp可以定量检测病原物,由于LAMP的特性,Bst DNA polymerase具有链置换能力,对土壤DNA提取物中包含的抑制物质具有很好的耐受性,针对土壤开展检测工作,采用不开盖、不易受污染物的影响且能现场检测土壤样品,分析判断反应产物的方法极为简单,适宜于广泛地推广应用。