本发明公开了种可用于犬乳腺肿瘤诊断和预后判断的分子标志物,所述分子标志物为ICAM1基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;以及一对检测ICAM1基因表达的RT‑qPCR检测引物,其核苷酸序列如SEQ ID NO:2~3所示。并制备得到了一种犬乳腺肿瘤诊断和预后判断的试剂盒。ICAM1基因仅在恶性肿瘤组中显著低表达;在从转移灶分离出的犬乳腺肿瘤细胞中的ICAM1基因表达量与原发灶细胞相比差异显著,说明其可以鉴别犬乳腺肿瘤的良恶性并参与了犬乳腺肿瘤的浸润、转移过程。因此,ICAM1可以作为犬乳腺肿瘤诊断和预后判断的分子标志物。本发明提供的与犬乳腺肿瘤转移相关的分子标志物,具有较高的敏感性和特异性,对犬乳腺肿瘤的性质鉴别、预后评估、及时确定治疗方案,提高患病犬只的存活率具有重要的意义。