CHILDREN S HOSPITAL OF PHILADELPHIA:THE;ザ・チルドレンズ・ホスピタル・オブ・フィラデルフィア
发明人:
JOHN FRASER WRIGHT,ライト、ジョン、フレイザー,QU GUANG,ク、グアング,BERND HAUCK,ホウク、バーント,KATHERINE HIGH,ハイ、キャサリン
申请号：
JP2018072783
公开号：
JP2018121653A
申请日:
2018.04.04
申请国别(地区):
JP
年份:
2018
代理人:
摘要：
PROBLEM TO BE SOLVED: To provide methods for preparing highly purified adeno-associated virus (AAV) vector particles superior for clinical use.SOLUTION: Disclosed is a method comprising the steps of: a) collecting cells comprising a recombinant AAV； b) condensing the cells by using tangential flow filtration； c) lysing the cells by microfluidization to form a lysate； d) clearing the lysate obtained in c) by filtration； e) purifying the AAV particles by ion exchange column chromatography and condensing the column eluate by selective tangential flow filtration； f) mixing the eluate and cesium chloride and subjecting the mixture to centrifugation； g) following the step f), collecting and subjecting the virus particles to the same buffer exchange by tangent flow filtration； h) formulating the purified AAV particles with a surfactant to provide an AAV formulation； and i) optionally filtrating the formulation to eliminate residual impurities.SELECTED DRAWING: Figure 2【課題】臨床用途において優れている高純度アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター粒子を調製するための方法の提供。【解決手段】以下の工程、ａ）組換えＡＡＶを有する細胞を採取する、ｂ）接線流ろ過を用いて前記細胞を濃縮する、ｃ）溶解物を形成するために顕微溶液化によって前記細胞を溶解する、ｄ）ろ過により工程ｃ）の前記溶解物を浄化する、前記ろ過する工程と、ｅ）イオン交換カラムクロマトグラフィーによってＡＡＶ粒子を精製し、且つ選択的に接線流ろ過によってカラム溶出液を濃縮し、ｆ）前記溶出液と塩化セシウムを混合し、且つ当該混合物を遠心分離にかける、ｇ）工程ｆ）に続いてウイルス粒子を収集し、且つ接線流ろ過によって同一の緩衝液交換を受けさせる、ｈ）ＡＡＶ粒子製剤を提供するために界面活性剤によって精製されたＡＡＶ粒子を製剤化する、ｉ）任意の残留不純物を除去するために前記製剤をろ過する工程、を有する方法。【選択図】図２
