本发明公开了一种ClfA‑A靶位的金黄色葡萄球菌奶牛乳房炎疫苗的制备方法,提取金黄色葡萄球菌DNA,根据GenBank上已提交的ClfA基因序列,分别设计上游引物与下游引物,且向上游引物与下游引物中分别引入Bam H I和Hind III酶切位点,制得重组质粒pET‑ClfA‑A;进行PCR扩增,将重组质粒pET‑ClfA‑A转入感受态细胞BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导,对目的蛋白进行大量表达和纯化;取家兔,免疫后采血获取血清,进行检测;经过免疫程序后采血获取血清,测定抗体效价后,制得金黄色葡萄球菌奶牛乳房炎疫苗。本发明建立的有效的金黄色葡萄球菌凝集因子蛋白(ClfA‑A)的制备,为以ClfA‑A为靶位的疫苗研究,对金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎疫苗的研究提供试验依据。