本发明公开了一种诊断猪脐带血伪狂犬病毒野毒株的Taqman实时荧光PCR试剂盒及其用途。所述试剂盒包括一对引物和一条特异性荧光探针,所述引物的序列如SEQ ID NO:1以及SEQ ID NO:2所示,所述荧光探针的序列如SEQ ID NO:3所示。本发明的试剂盒能够特异性的诊断猪脐带血伪狂犬病毒野毒株,并具有较高的灵敏度,重复性优,可以精准评估和诊断母猪伪狂犬病毒带毒排毒、仔猪感染情况,还可开展伪狂犬疾病的净化和效果评估等,具有十分广泛的应用价值。同时本发明的试剂盒检测过程中需要仪器设备相对简单,检测过程简便,检测时间短;结果相对可靠,不易污染;技术操作要求低,可以在基层大量推广;可以相对容易质量控制,易于标准化。