本发明一种分离的H9N2禽流感病毒,其基因组由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的RNA片段组成。还提供了一种用于预防H9N2禽流感病毒的疫苗。还提供了上述疫苗的制备方法,包括一个疫苗抗原液制备及毒价测定的步骤,一个抗原液灭活的步骤,一个制备油相佐剂的步骤;一个制备疫苗水相的步骤;一个配制疫苗的步骤。接种本发明的疫苗,可以预防本发明的抗原群D群的H9N2禽流感病毒的感染。使用本发明的抗体,可以治疗抗原群D群的H9N2禽流感病毒的感染。