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一种快速检测转基因烤后烟叶的四重PCR引物及方法
- 专利权人:
- 贵州省烟草科学研究院
- 发明人:
- 余婧,赵杰宏,邹颉,郭玉双,林世锋,付强,张孝廉,余世洲
- 申请号：
- CN201410217600.3
- 公开号：
- CN104152541B
- 申请日:
- 2014.09.03
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2016
- 代理人:
- 吴无惧
- 摘要：
- 本发明公开了一种快速检测转基因烤后烟叶的四重PCR引物及方法。该方法所涉及的引物由烟草内源基因元件NR(硝酸还原酶基因)及外源基因元件(包括35S启动子、NOS终止子、NPTII筛选标记基因)组成。通过四重PCR扩增，在一次PCR反应中可同时检测NR基因及3个外源基因，检测方法包括以下步骤：四对引物稀释成等摩尔浓度后按1:1:1:1(V/V)比例混合，在20μL反应体系中添加Mg2+1.5mmol/L、dNTP125μmol/L、Taq酶1U、混合引物1μmol/L，DNA100ng，在退火温度65℃，循环数35个的PCR反应条件下，能够有效检测出烤后烟叶百分比含量为0.9％(V/V)的转基因成分。本发明的效果是：重复性强、稳定性好、操作简单、节约成本。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
