The present invention provides a retroviral vector containing a transcription unit comprising a transcription regulatory sequence and a gene encoding a polypeptide having single-stranded RNA-specific endoribonuclease activity which is placed so that its expression can be controlled by the regulatory sequence, wherein the unit is placed so that the direction of the transcription of mRNA from the unit is opposite to the direction of transcription of the RNA genome of the retroviral vector. By using the vector constructed as described above, viral supernatant showing high gene transfer efficiency can be prepared. The retroviral vector of the present invention is useful for the treatment and/or prevention of cancers and virus infections.본 발명은 전사 조절 서열과, 상기 서열에 의해 발현의 제어가 가능한 형태로 배치된 싱글-스트랜드 RNA에 특이적인 엔도리보뉴클레아제 활성을 가지는 폴리펩티드를 코딩하는 유전자로 이루어진 전사 유닛을 함유하는 레트로바이러스 벡터로써, 상기 유닛의 mRNA의 전사 방향이 레트로바이러스 벡터의 RNA 게놈의 전사 방향에 대해서 역방향이 되도록 상기 유닛이 배치되는 것을 특징으로 하는 레트로바이러스 벡터를 제공한다. 상기 구성의 벡터를 사용하는 것에 의해, 높은 유전자 도입효율을 나타내는 바이러스 상청액을 조제할 수 있다. 본 발명의 레트로바이러스 벡터는 암이나 바이러스 감염증의 치료, 예방에 유용하다.