本发明公开了一种检测小麦高籽粒蛋白质含量的引物、试剂盒、检测方法及其应用；所述引物的上游引物序列如SEQ ID NO：Ⅰ所示，下游引物序列如SEQ ID NO：Ⅱ所示。本发明所提供的检测小麦高GPC的方法可靠、简便、实用，在小麦种质资源评价和育种的分子标记辅助选择中具有重要应用前景，同时为鉴定高籽粒蛋白质含量的小麦品种提供了参考依据。本发明在育种杂交第2代即可对籽粒高蛋白质含量进行筛选，克服了常规方法只能在杂交第4代之后才能对籽粒高蛋白质含量进行筛选的难题，因此减少了育种家对该性状选择的工作量，提高选择的准确性和育种效率，是一种高效、快速的育种新技术。
